خالص سازی جزیی آنزیم آلفامانوزیداز از گیاه سویاواثر مهارکنندگی kcn و nan3 و یونهای دو ظرفیتی کبالت، نیکل، مس و روی بر فعالیت آن در شرایط in vitro

آلفا مانوزیدازها آنزیم هایی هستند که در کاتابولیسم و دگرگونی زنجیره های قندی دارای مانوز بالا از الیگوساکاریدهای موجود در گلیکوپروتئین ها نقش بسیار مهمی را ایفا می کنند. این موضوع در موجودات مختلف و همچنین در صنعت دارای اهمیت می باشد. با توجه به اهمیت آنزیم آلفا مانوزیداز، در این پروژه اقدام به خالص سازی جزیی آن از سویا کرده و اثر مهارکننـدگیkcn ، nan3 ویونهای دوظرفیتی کبالت ، نیکل ، مس و روی را برفعالیت آن درشرایط in vitro بررسی و همچنین ویژگی ها و مشخصات سینتیکی آنزیم را تعیین نمودیم. آنزیم آلفا مانوزیداز طی چندین مرحله و با استفاده ازسانتریفیوژ نمودن پی درپی، رسوب با بوتانل، استن و سولفات آمونیوم(80-30%) با استفاده از سرم فیزیولوژی به طور جزیی خالص گردید. سپس با استفاده ازکیسه دیالیز و بعد از آن ستون کروماتوگرافی با ژل سفادکس100 - g مبادرت به استخراج هر چه بیشتر آن نمودیم. در حین کار در دو مرحله متوالی از استخراج، میزان پروتئین محاسبه گردید که نشان دهنده سیر نزولی آن از مرحله ای به مرحله بعد بود. در ادامه فراکشن حاوی آنزیم را با استفاده از ژل پلی اکریل آمید ، الکتروفورز نمودیم و پس از رنگ آمیزی ژل به دو روش کوماسی بلو و نیترات نقره با مشاهده باندها به یکی از اهداف این پروژه (خالص سازی جزیی آنزیم) دست یافتیم. سپس خصوصیات سینتیکی آنزیم و تاثیر مهارکنندگی ترکیبات شیمیایی مورد نظر بر فعالیت آن مورد بررسی قرارگرفت. دمای مناسب آنزیم 50 درجه سانتیگراد، ph مناسب 2/5، فعالیت مخصوص u/mg 614/. وkm آنزیم 50 بدست آمد. یون دو ظرفیتی مس بیشترین اثر مهار کنندگی را داشت که با افزایش غلظت اثر مهارکنندگی آن افزایش یافت، در مقایسه یون دو ظرفیتی روی بیشترین اثر فعال کنندگی را داشت که با افزایش غلظت اثر فعال کنندگی آن کاهش یافت. واژگان کلیدی لوبیای سویا ، خالص سازی ، آلفا مانوزیداز ، کروماتوگرافی ، الکتروفورز ژل پلی اکریل آمید ، یونهای دو ظرفیتی